Левомицетин и его контроль в продуктах животноводства

Сотрудниками РУП «Научно-практический центр гигиены» разработана новая сверхчувствительная методика определения содержания остаточных количеств левомицетина в сырье животного происхождения и пищевых продуктах методом ВЭЖХ/МС–МС. Ее чувствительность составляет 0,2 мкг/кг.

Среди ряда веществ, контаминирующих продовольственное сырье и пищевые продукты, особое место занимают антибиотики. Данные вещества применяются при лечении больных животных, используются в качестве кормовых добавок и препаратов для стимуляции роста. Остаточные количества антибиотиков часто обнаруживают в молоке и молочных продуктах, в пищевых продуктах животного происхождения вследствие нарушения режима профилактики и лечения животных, а также в результате несоблюдения времени выдержки перед забоем.

Наличие антибиотика в пищевом сырье может изменить ход технологического процесса и повлиять на качество выпускаемой продукции. Кроме того, антибиотики могут специально вноситься в молоко производителями (фальсификация антибиотиками) для предотвращения преждевременного его скисания. Далее с продуктами питания они могут поступать в организм человека и оказывать неблагоприятное влияние на здоровье. Длительное использование в пищу продуктов, содержащих остаточное количество антибиотиков, может приводить к неблагоприятным для человека последствиям: возникновению аллергических реакций, дисбактериозов, анафилактического шока, увеличению антибиотикоустойчивости микрофлоры в организме, что впоследствии затрудняет выбор антибактериальных препаратов для лечения различных воспалительных заболеваний. Одним из таких антибиотиков является левомицетин.

Для экспортирования продукции за рубеж необходимо соблюдать требования международного ветеринарного кодекса и директив ЕС относительно выполнения ветеринарно-санитарных норм и правил при выращивании, производстве, переработке, хранении, транспортировании и реализации продукции. По этим причинам использование антибиотиков должно находиться под строгим санитарно-ветеринарным и гигиеническим контролем. Методы, применяемые для контроля наличия данных препаратов в продовольственном сырье и пищевых продуктах, можно разделить на микробиологические, физико-химические и иммунологические. Микробиологические методы (агародиффузный «чашечный» метод) определения основаны на измерении диаметра участков торможения роста бактерий, чувствительных к данному антибиотику (зон ингибиции). Эти методы являются сравнительно простыми и дешевыми, однако отличаются недостаточной чувствительностью, специфичностью и воспроизводимостью результатов.

Предпочтительным для контроля продовольственного сырья является иммуноферментный метод анализа, который обладает высокой чувствительностью, точностью, специфичностью, быстротой проведения анализа. Для определения левомицетина используют тест-системы типа «Ридаскрин Хлорамфинекол» и «МАХ SIGNAL Хлорамфинекол». Чувствительность этих методов в зависимости от анализируемого продукта составляет 0,01–0,25 мкг/кг (яйца, молоко, рыба, мясо). Данный метод широко используется для проведения скрининговых исследований. В случае установления фактов отсутствия антибиотиков в сырье с помощью иммуноферментного метода, обнаружение их в готовой продукции исключено. Недостатком указанного метода является то, что в настоящее время он не применим для готовой продукции. Это связано с тем, что производимые за рубежом тест-системы предназначены только для определения антибиотиков в продовольственном сырье, так как нормирование антибиотиков в странах Евросоюза проводится по сырью. Еще один недостаток — большой процент ложноположительных результатов. В случае получения положительного отклика, наличие антибиотика или его отсутствие в анализируемой продукции необходимо подтверждать другими методами анализа.

Методы высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) со спектрофотометрическим детектированием также используются для контроля содержания остаточных количеств левомицетина и его метаболитов в продовольственном сырье и пищевых продуктах. Однако чувствительность данных методов недостаточно велика и составляет 6,5—10,0 мкг/кг.

Также следует отметить, что ни один из вышеперечисленных методов не распространяется на пищевые продукты для детского и специализированного питания (для беременных и кормящих женщин, диетическое, спортивное), БАДы и пищевые добавки, содержащие продукты животноводства.

В странах Европы, Японии, США содержание хлорамфеникола регламентируется на уровне минимальной чувствительности метода, которая составляет 0,3 мкг/кг. В Беларуси в соответствии с требованиями СанПиГН до недавнего времени наличие левомицетина в мясе, мясных изделиях, молоке и молочных продуктах, продуктах для детского питания также не допускалось в пределах применяемого метода определения. В связи с введением в действие технического регламента Таможенного союза (ТР ТС 033/2013) содержание левомицетина в продуктах питания было четко регламентировано (о декларировании соответствия продукции в рамках Таможенного союза с выдачей документов по Единой форме читать здесь). Так, в сыром молоке, сыром обезжиренном молоке, сырых сливках и во всей молочной продукции содержание левомицетина (хлорамфеникола) не допускается более 0,01 мг/кг, а для продукции детского питания на молочной основе установлены еще более жесткие нормативы, при которых содержание левомицетина (хлорамфеникола) не должно превышать допустимого уровня 0,0003 мг/кг.

В настоящее время высокоточным аналитическим методом контроля антибиотиков является метод высокоэффективной жидкостной хроматографии с тандемной масс-спектрометрией (далее — ВЭЖХ/МС–МС). Этот метод позволяет качественно и количественно определять остаточное количество антибиотиков как в сырье, так и в готовой продукции. Кроме того, с помощью указанного метода возможно разделение и идентификация различных действующих веществ, относящихся к одной группе. Данный метод имеет хорошую воспроизводимость и надежность, а также позволяет обнаруживать левомицетин в продукции животноводства на уровне 0,2 мкг/кг. По этой причине ВЭЖХ/МС–МС признан арбитражным методом определения антибиотиков в сырье и продукции животноводства в странах Евросоюза и России. Однако в Республике Беларусь метод ВЭЖХ/МС–МС для определения антибиотиков не применялся из-за отсутствия метрологически аттестованной методики.

Учитывая все вышесказанное, возникла необходимость разработки унифицированной методики определения остаточных количеств левомицетина во всех группах пищевых продуктов, в составе которых используется животноводческое сырье, методом ВЭЖХ/МС–МС, который бы соответствовал санитарно-гигиеническим требованиями Республики Беларусь, Таможенного союза и Евросоюза.

Сотрудниками Научно-практического центра гигиены разработана и внедрена в практику методика, которая позволяет контролировать содержание остаточных количеств левомицетина в различных видах пищевой продукции на уровне 0,2 мкг/кг. Метод определения основан на извлечении левомицетина органическим растворителем, очистке экстракта методом твердофазной экстракции и хроматографическом разделении с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии в обращенно-фазовом варианте с масс-спектрометрическим детектированием.

В настоящее время проводится определение содержания остаточных количеств левомицетина методом ВЭЖХ/МС–МС в сырье и продукции животноводства, а также в продуктах для детского питания на мясной и молочной основе. Внедрение данного метода позволило успешно вести контроль безопасности продукции, производимой на территории Беларуси, ввозимой из-за рубежа, а также предназначенной для поставки на экспорт.

Методика метрологически аттестована в БелГИМ и утверждена должным образом МВИ МН 4790–2013 «Определение содержания остаточных количеств левомицетина в сырье животного происхождения и пищевых продуктах методом ВЭЖХ/МС–МС».

Е. ШУПИЛОВА, научный сотрудник;  О. ШУЛЯКОВСКАЯ, кандидат химических наук, заведующая лабораторией химии пищевых продуктов РУП «Научно-практический центр гигиены»

05-03-2015